Влияние фотосенсибилизатора радахлорина и фотодинамического воздействия на индуцированную коллагеном агрегацию тромбоцитов

Цель исследования - изучение влияния фотосенсибилизатора радахлорина и фотодинамического воздействия (in vitro и in vivo) на агрегационную активность тромбоцитов. Материал и методы исследования. Опыты проведены на крысах-самцах линии Wistar. Из венозной крови получали плазму, обогащенную тромбоцитами (PRP). Агрегационную активность тромбоцитов (Тр) определяли турбодиметрическим методом (анализатор АТ-02, РФ), индуктор агрегации - коллаген (Chrono-Log Corporation, США) 4 мкг/мл. В качестве фотосенсибилизатора (ФС) использовали радахлорин (РХ), (Радафарма, Россия). Пробы PRP, содержащие ФС, облучали с помощью лазерного аппарата АЛОД-Гранат (ООО «Алком медика», Россия) длина волны 662 нм, плотность мощности - 0,05 Вт/см², плотность энергии - 12,5, 25, 50 Дж/см². Результаты исследования. После 5-минутной инкубации PRP с РХ (10, 20, 40 мкг/мл) наблюдалось дозозависимое угнетение агрегации Тр. Облучение PRP (25, 50 Дж/см²) в присутствии РХ (14 мкг/мл) значимо усиливало ингибирующий эффект. При дозе 50 Дж/см² латентный период и период изменения формы Тр после стимуляции коллагеном отсутствовали, а интенсивность агрегации уменьшалась в 3 раза. Через 3 часа после внутривенного введения РХ (5 мг/кг) интенсивность агрегации Тр значимо не изменялась, а после облучения PRP (25 Дж/см²) уменьшалась в 5 раз. Заключение. РХ оказывает дозозависимое ингибирующее влияние на коллаген-индуцированную агрегацию Тр крыс. Фотоактивация увеличивает этот эффект. Одним из возможных механизмов этого эффекта может быть фотодинамическое повреждение мембраны Тр и нарушение активации гликопротеиновых рецепторов, ответственных за агрегацию Тр.

Радахлорин, фотоактивация, коллаген, агрегация тромбоцитов, Radahlorine, photoactivation, collagen, platelet aggregation

1. Белозерцева И.В., Драволина О.А., Тур М.А. Руководство по использованию лабораторных животных для научных и учебных целей в ПСПбГМУ им. акад. И.П. Павлова / Под ред. Э.Э. Звартау. - СПб.: Изд-во СПбГМУ 2014. - 80 с.

2. Зорина Т.Н., Далидович А.А., Марченко Л.Н. и др. Механизмы фотодинамической терапии неоваскулярных заболеваний глазного дна // Материалы научно-практической конференции / Под ред. С.М. Смотрин и др. - Гродно: ГрГМУ 2011. -С. 27-30.

3. Решетников А.В., Кемов Ю.В., Залевский И.Д. и др. Основные результаты доклинического изучения нового фотосенсибилизатора Радахлорина // Российский биотерапевтический журнал. - 2002. - Т. 1. - № 2. - С. 141.

4. Самаль А.Б., Зорина Т.Е., Черенкевич С.Н. Сенсибилизированное хлорином е6 фотоингибирование агрегации тромбоцитов. Участие активных форм кислорода // Гематология и трансфузиология. - 1991. - № 4. - Т. 36. - С. 19-21.

5. Шатурный В.И., Шахиджанов С.С., Свешников А.Н. и др. Активаторы, рецепторы и пути внутриклеточной сигнализации в тромбоцитах крови // Биомедицинская химия. - 2014. - Т. 60. -Вып. 2. - С. 182-199.

6. Экспериментальные аспекты фотодинамической терапии / Под ред. А.Ф. Цыба, М.А. Каплан. - Калуга: Изд-во научной литературы Бочкаревой Н.Ф., 2010. - 112 с.

7. Brill A.G., Kirichuk V.F., Brill G.E. Influence of He-Ne laser irradiation on platelet aggregation // Abstracts of the first Congress of the World Association of the Laser Therapy, WALT 1996. Publishers LTD Laser Therapy. - 1996. - Vol. 8. - P. 5-114.

8. Chuannong Zhou Mechanisms of tumor necrosis induced by photodynamic therapy // Journal of Photochemistry and Photobiology. - 1989. - № 3. - Р. 299-318.

9. Fungaloi P. et al. Platelet adhesion to Photodynamic Therapy // Photochemistry and Photobiol. - 1997. - № 4. - Р. 412-417.

10. Hanasaki K., Nakano T., Arita H. Two phasic generation of thromboxane A2 by the action of collagen on rat platelets // Thrombosis Reserarch. - 1987. - № 46. - Р. 425-436.

11. Hendersen B.W., Wieman T.J., Haydon P.S. The effects of thrombocytopenia on vessel stasis and macromolecular leakage therapy using photofrin // Photochem Photobiol. - 1997. - № 66. -Р. 513-517.

12. Ji Young Park, Hyun Dong Ji, Bo Ra Jeon et al. Chlorin e6 prevents ADP-induced platelet aggregation by decreasing PI3K-Akt phosphorylation and promoting cAMP production // Evidence-Based complementary and Alternativ Medicine. - 2013. - Article ID 569160. - 11 p. http://dx.doi.org/10.1155/2013/569160.

13. Lee N.B., Blaufox M.D. Blood volume in the rat // J. Nucl. Med. -1985. - Vol. 26. - P. 72-76.

14. Nakano T., Terawaki A., Arita H. Measurement of thromboxane A2-induced elevation of ionized calcium in collagen-stimulated platelets with the photoprotein, aequorin // J. Biochem. - 1986. -№ 99. - Р. 1285-1288.

15. Olban M., Wachowicz B., Koter M., Bryszewska M. The biostimulatory effect of red laser irradiation on pig blood platelet function // J. Cell Biol. Intern. - 1998. - Vol. 22. - № 3. - Р. 245-248.

16. Reed M.W.R., Wieman T.J., Schuschke D.A. et al. A Comparison of the effects of photodynamic therapy on normal and blood vessels in rat microcirculation // Radiation Research. - 1989. - Vol. 119. -№ 3. - Р. 542-552.

17. Riondino S., Lotti L.V., Cutini L., Pulcinelli F.M. Collagen-induced platelet shape change is not affected by positive feedback pathway inhibitors and cAMP-elevating agents // Journal of Biological Chemistry. - 2005. - Vol. 280. - № 8. - Р. 6504-6510.

18. Senge M.O., Radomski M.W. Platelets, photosensitizers, and PDT // Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. - 2013. - № 10. -Р. 1-16.

19. Strauss W.S.L., Sailer R., Schneckenburger H. et al. Photodynamic efficacy of naturally occurring porphyrins in endothelial cells in vitro and microvasculature in vivo // Journal of Photochemistry and Photobiology B:Biology. - 1997. - № 39. - Р. 176-184.