goslasmedЛазерная медицинаLaser Medicine2071-80042686-8644Skobelkin Centre for Laser Medicine - a branch of the Federal Clinical Center for High Medical Technologies, FMBA of Russia10.37895/2071-8004-2017-21-4-42-46goslasmed-383Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯORIGINAL RESEARCHESВлияние фотосенсибилизатора радахлорина и фотодинамического воздействия на индуцированную коллагеном агрегацию тромбоцитовEffects of photosensitizer Radahlorine and photodynamic effects at the collagen-induced platelet aggregationГришачеваТатьяна ГеоргиевнаGrishachevaT. G.laser82@mail.ruДементьеваИ. Н.DementjevaI. N.noemail@neicon.ruЧефуС. Г.ChefuS. G.noemail@neicon.ruПетрищевН. Н.PetrishchevN. N.noemail@neicon.ruПервый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова; Россия Северо-Западный федеральный медицинский исследовательский центр им. В.А. АлмазоваРоссия2017030820182144246Copyright © Гришачева Т.Г., Дементьева И.Н., Чефу С.Г., Петрищев Н.Н., 20182018Гришачева Т.Г., Дементьева И.Н., Чефу С.Г., Петрищев Н.Н.Grishacheva T.G., Dementjeva I.N., Chefu S.G., Petrishchev N.N.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://goslasmed.elpub.ru/jour/article/view/383

Цель исследования - изучение влияния фотосенсибилизатора радахлорина и фотодинамического воздействия (in vitro и in vivo) на агрегационную активность тромбоцитов. Материал и методы исследования. Опыты проведены на крысах-самцах линии Wistar. Из венозной крови получали плазму, обогащенную тромбоцитами (PRP). Агрегационную активность тромбоцитов (Тр) определяли турбодиметрическим методом (анализатор АТ-02, РФ), индуктор агрегации - коллаген (Chrono-Log Corporation, США) 4 мкг/мл. В качестве фотосенсибилизатора (ФС) использовали радахлорин (РХ), (Радафарма, Россия). Пробы PRP, содержащие ФС, облучали с помощью лазерного аппарата АЛОД-Гранат (ООО «Алком медика», Россия) длина волны 662 нм, плотность мощности - 0,05 Вт/см2, плотность энергии - 12,5, 25, 50 Дж/см2. Результаты исследования. После 5-минутной инкубации PRP с РХ (10, 20, 40 мкг/мл) наблюдалось дозозависимое угнетение агрегации Тр. Облучение PRP (25, 50 Дж/см2) в присутствии РХ (14 мкг/мл) значимо усиливало ингибирующий эффект. При дозе 50 Дж/см2 латентный период и период изменения формы Тр после стимуляции коллагеном отсутствовали, а интенсивность агрегации уменьшалась в 3 раза. Через 3 часа после внутривенного введения РХ (5 мг/кг) интенсивность агрегации Тр значимо не изменялась, а после облучения PRP (25 Дж/см2) уменьшалась в 5 раз. Заключение. РХ оказывает дозозависимое ингибирующее влияние на коллаген-индуцированную агрегацию Тр крыс. Фотоактивация увеличивает этот эффект. Одним из возможных механизмов этого эффекта может быть фотодинамическое повреждение мембраны Тр и нарушение активации гликопротеиновых рецепторов, ответственных за агрегацию Тр.

Purpose. To study the impact of photosensitizer Radahlorine and photodynamic effects (in vitro and in vivo) at the platelet aggregation activity. Materials and methods. Wistar rats (males) were used in the trial. Platelet-rich plasma (PRP) was taken from the venous blood. Aggregation activity of platelets (Pl) was measured with the turbodimetric technique (analyzer AT-02, Russia), aggregating inductor - collagen (Chrono-Log Corporation, USA) 4 ng/ml. Radahlorine (RH) (Radapharma, Russia) was used as a photosensitizer (PS). PRP samples with PS were irradiated with laser device ALOD-Granat (Alcom Medica, Russia) with wavelength 662 nm, power density - 0.05 W/cm2, energy density - 12.5 J/cm2, 25 J/cm2, 50 J/cm2. Results. Dose-depending Pl aggregation inhibition was observed after 5-minute incubation of PRP with RH (10, 20, 40 ng/ml). PRP irradiation (25 J/cm2, 50 J/cm2) in presence of RH (14 ng/ml) significantly increased an inhibitory effect. Under the dose equal to 50 J/cm2, latent period and PL shape-changing phase after Pl stimulation by collagen were absent, and the aggregation intensity decreased by 3 times. In 3 hours after RH (5ng/ml) intravenous administration, intensity of Pl aggregation did not change significantly, but after PRP irradiation with 25 J/cm2 it decreased by 5 times. Conclusion. Radachlorine has a dose-depending inhibition effect at collagen-induced Pl aggregation in rats. Photoactivation increases this effect. One of the probable mechanisms of this effect is photodynamic damage of Pl membrane and impaired activation of glycoprotein receptors responsible for Pl aggregation.

Радахлоринфотоактивацияколлагенагрегация тромбоцитовRadahlorinephotoactivationcollagenplatelet aggregationReferencesБелозерцева И.В., Драволина О.А., Тур М.А. Руководство по использованию лабораторных животных для научных и учебных целей в ПСПбГМУ им. акад. И.П. Павлова / Под ред. Э.Э. Звартау. - СПб.: Изд-во СПбГМУ 2014. - 80 с.Белозерцева И.В., Драволина О.А., Тур М.А. Руководство по использованию лабораторных животных для научных и учебных целей в ПСПбГМУ им. акад. И.П. Павлова / Под ред. Э.Э. Звартау. - СПб.: Изд-во СПбГМУ 2014. - 80 с.Зорина Т.Н., Далидович А.А., Марченко Л.Н. и др. Механизмы фотодинамической терапии неоваскулярных заболеваний глазного дна // Материалы научно-практической конференции / Под ред. С.М. Смотрин и др. - Гродно: ГрГМУ 2011. -С. 27-30.Зорина Т.Н., Далидович А.А., Марченко Л.Н. и др. Механизмы фотодинамической терапии неоваскулярных заболеваний глазного дна // Материалы научно-практической конференции / Под ред. С.М. Смотрин и др. - Гродно: ГрГМУ 2011. -С. 27-30.Решетников А.В., Кемов Ю.В., Залевский И.Д. и др. Основные результаты доклинического изучения нового фотосенсибилизатора Радахлорина // Российский биотерапевтический журнал. - 2002. - Т. 1. - № 2. - С. 141.Решетников А.В., Кемов Ю.В., Залевский И.Д. и др. Основные результаты доклинического изучения нового фотосенсибилизатора Радахлорина // Российский биотерапевтический журнал. - 2002. - Т. 1. - № 2. - С. 141.Самаль А.Б., Зорина Т.Е., Черенкевич С.Н. Сенсибилизированное хлорином е6 фотоингибирование агрегации тромбоцитов. Участие активных форм кислорода // Гематология и трансфузиология. - 1991. - № 4. - Т. 36. - С. 19-21.Самаль А.Б., Зорина Т.Е., Черенкевич С.Н. Сенсибилизированное хлорином е6 фотоингибирование агрегации тромбоцитов. Участие активных форм кислорода // Гематология и трансфузиология. - 1991. - № 4. - Т. 36. - С. 19-21.Шатурный В.И., Шахиджанов С.С., Свешников А.Н. и др. Активаторы, рецепторы и пути внутриклеточной сигнализации в тромбоцитах крови // Биомедицинская химия. - 2014. - Т. 60. -Вып. 2. - С. 182-199.Шатурный В.И., Шахиджанов С.С., Свешников А.Н. и др. Активаторы, рецепторы и пути внутриклеточной сигнализации в тромбоцитах крови // Биомедицинская химия. - 2014. - Т. 60. -Вып. 2. - С. 182-199.Экспериментальные аспекты фотодинамической терапии / Под ред. А.Ф. Цыба, М.А. Каплан. - Калуга: Изд-во научной литературы Бочкаревой Н.Ф., 2010. - 112 с.Экспериментальные аспекты фотодинамической терапии / Под ред. А.Ф. Цыба, М.А. Каплан. - Калуга: Изд-во научной литературы Бочкаревой Н.Ф., 2010. - 112 с.Brill A.G., Kirichuk V.F., Brill G.E. Influence of He-Ne laser irradiation on platelet aggregation // Abstracts of the first Congress of the World Association of the Laser Therapy, WALT 1996. Publishers LTD Laser Therapy. - 1996. - Vol. 8. - P. 5-114.Brill A.G., Kirichuk V.F., Brill G.E. Influence of He-Ne laser irradiation on platelet aggregation // Abstracts of the first Congress of the World Association of the Laser Therapy, WALT 1996. Publishers LTD Laser Therapy. - 1996. - Vol. 8. - P. 5-114.Chuannong Zhou Mechanisms of tumor necrosis induced by photodynamic therapy // Journal of Photochemistry and Photobiology. - 1989. - № 3. - Р. 299-318.Chuannong Zhou Mechanisms of tumor necrosis induced by photodynamic therapy // Journal of Photochemistry and Photobiology. - 1989. - № 3. - Р. 299-318.Fungaloi P. et al. Platelet adhesion to Photodynamic Therapy // Photochemistry and Photobiol. - 1997. - № 4. - Р. 412-417.Fungaloi P. et al. Platelet adhesion to Photodynamic Therapy // Photochemistry and Photobiol. - 1997. - № 4. - Р. 412-417.Hanasaki K., Nakano T., Arita H. Two phasic generation of thromboxane A2 by the action of collagen on rat platelets // Thrombosis Reserarch. - 1987. - № 46. - Р. 425-436.Hanasaki K., Nakano T., Arita H. Two phasic generation of thromboxane A2 by the action of collagen on rat platelets // Thrombosis Reserarch. - 1987. - № 46. - Р. 425-436.Hendersen B.W., Wieman T.J., Haydon P.S. The effects of thrombocytopenia on vessel stasis and macromolecular leakage therapy using photofrin // Photochem Photobiol. - 1997. - № 66. -Р. 513-517.Hendersen B.W., Wieman T.J., Haydon P.S. The effects of thrombocytopenia on vessel stasis and macromolecular leakage therapy using photofrin // Photochem Photobiol. - 1997. - № 66. -Р. 513-517.Ji Young Park, Hyun Dong Ji, Bo Ra Jeon et al. Chlorin e6 prevents ADP-induced platelet aggregation by decreasing PI3K-Akt phosphorylation and promoting cAMP production // Evidence-Based complementary and Alternativ Medicine. - 2013. - Article ID 569160. - 11 p. http://dx.doi.org/10.1155/2013/569160.Ji Young Park, Hyun Dong Ji, Bo Ra Jeon et al. Chlorin e6 prevents ADP-induced platelet aggregation by decreasing PI3K-Akt phosphorylation and promoting cAMP production // Evidence-Based complementary and Alternativ Medicine. - 2013. - Article ID 569160. - 11 p. http://dx.doi.org/10.1155/2013/569160.Lee N.B., Blaufox M.D. Blood volume in the rat // J. Nucl. Med. -1985. - Vol. 26. - P. 72-76.Lee N.B., Blaufox M.D. Blood volume in the rat // J. Nucl. Med. -1985. - Vol. 26. - P. 72-76.Nakano T., Terawaki A., Arita H. Measurement of thromboxane A2-induced elevation of ionized calcium in collagen-stimulated platelets with the photoprotein, aequorin // J. Biochem. - 1986. -№ 99. - Р. 1285-1288.Nakano T., Terawaki A., Arita H. Measurement of thromboxane A2-induced elevation of ionized calcium in collagen-stimulated platelets with the photoprotein, aequorin // J. Biochem. - 1986. -№ 99. - Р. 1285-1288.Olban M., Wachowicz B., Koter M., Bryszewska M. The biostimulatory effect of red laser irradiation on pig blood platelet function // J. Cell Biol. Intern. - 1998. - Vol. 22. - № 3. - Р. 245-248.Olban M., Wachowicz B., Koter M., Bryszewska M. The biostimulatory effect of red laser irradiation on pig blood platelet function // J. Cell Biol. Intern. - 1998. - Vol. 22. - № 3. - Р. 245-248.Reed M.W.R., Wieman T.J., Schuschke D.A. et al. A Comparison of the effects of photodynamic therapy on normal and blood vessels in rat microcirculation // Radiation Research. - 1989. - Vol. 119. -№ 3. - Р. 542-552.Reed M.W.R., Wieman T.J., Schuschke D.A. et al. A Comparison of the effects of photodynamic therapy on normal and blood vessels in rat microcirculation // Radiation Research. - 1989. - Vol. 119. -№ 3. - Р. 542-552.Riondino S., Lotti L.V., Cutini L., Pulcinelli F.M. Collagen-induced platelet shape change is not affected by positive feedback pathway inhibitors and cAMP-elevating agents // Journal of Biological Chemistry. - 2005. - Vol. 280. - № 8. - Р. 6504-6510.Riondino S., Lotti L.V., Cutini L., Pulcinelli F.M. Collagen-induced platelet shape change is not affected by positive feedback pathway inhibitors and cAMP-elevating agents // Journal of Biological Chemistry. - 2005. - Vol. 280. - № 8. - Р. 6504-6510.Senge M.O., Radomski M.W. Platelets, photosensitizers, and PDT // Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. - 2013. - № 10. -Р. 1-16.Senge M.O., Radomski M.W. Platelets, photosensitizers, and PDT // Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. - 2013. - № 10. -Р. 1-16.Strauss W.S.L., Sailer R., Schneckenburger H. et al. Photodynamic efficacy of naturally occurring porphyrins in endothelial cells in vitro and microvasculature in vivo // Journal of Photochemistry and Photobiology B:Biology. - 1997. - № 39. - Р. 176-184.Strauss W.S.L., Sailer R., Schneckenburger H. et al. Photodynamic efficacy of naturally occurring porphyrins in endothelial cells in vitro and microvasculature in vivo // Journal of Photochemistry and Photobiology B:Biology. - 1997. - № 39. - Р. 176-184.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.